Misha Collins debutó como actor profesional en 1998 en la serie dramática Legacy, donde hizo el papel de Andrew. Después apareció en la serie de fantasía y drama Hechiceras, en el drama policíaco NYPD Blue y en la serie de ciencia ficción Seven days, hasta que en el 2002 fue elegido para interpretar al villano Alexis Drazen en la primera temporada de la serie 24. En la pantalla grande tuvo pequeñas apariciones en Inocencia interrumpida (1999) del director James Mangold, en Sobre mi cadáver (2008) dirigida por Jeff Lowell, y ha protagonizado películas como Par 6 (2002), Finding home (2003), Karla (2006), entre otras. También ha tenido apariciones como invitado en otras series como C.S.I., Sala de emergencias, C.S.I: Nueva York, Nip/Tuck, Timeless, así como en varias películas para televisión. Collins es mejor conocido por su papel del ángel Castiel en la serie de Supernatural, papel que realiza desde el 2008.