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Dos años después de su aventura en Una noche en el museo, en la que Larry Daley fungía como nuevo guardia de seguridad del Museo Natural de Historia. El hombre ha decidido renunciar a su posición para dedicarse por completo en su propia compañía, una empresa que inventa objetos y los vende en subastas. Mientras su empresa empieza a crecer lentamente, Daley descubre que el museo está siendo remodelado, por lo que sus piezas serán enviadas al Instituto Smithsoniano y serán sustituidas por hologramas y otros avances tecnológicos. Larry, convencido de que las piezas necesitan quedarse para que las futuras generaciones puedan maravillarse con ellas, enfrenta una batalla con el consejo del Museo, pero no logra convencerlos. En Una noche en el museo 2, Larry volverá a la aventura cuando Jedd, el vaquero, le llame para informarle que Dexter, el mono capuchino, ha robado la tabla de Ahkmen-Ra y, de caer en las manos incorrectas, podía despertar a un peligroso ejército del inframundo.
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