El director del filme, Sergio Manfio, ya dirigió en 2008 la serie titulada Leonardo.
El director Sergio Manfio ha hecho otros proyectos animados en torno a vida de célebres personajes históricos: Cuccioli: Il codice di Marco Polo (2010) y Galileo: Eppur Si Muove (2010, para la TV).
La cinta es una producción del estudio italiano Gruppo Alcuni, especializado en crear contenido para niños.
Aunque Leo Da Vinci: Misión Mona Lisa es una producción italiana, se produjo originalmente en el idioma inglés.
El cantante de pop italiano RIKI interpreta el tema principal de la película: Il tempo intorno.
La editorial italiana Mondadori fue uno de los patrocinadores del filme.