El arrogante empresario de ópera europeo, el tenor Rodolfo Lassparri, quiere enamorar a Rosa Castaldi, pero ella lo detesta y vive enamorada de Ricardo Baroni, un tenor desconocido que tiene mucho más talento que Lassparri. Todo lo que Ricardo necesita es una oportunidad para mostrar al mundo su talento. Lassparri es contratado para presentarse en la la New York Opera Company, y lleva a Rosa para que sea su acompañante, no sólo en el escenario, sino en la vida. En el barco a Nueva York, Ricardo, su amigo Fiorello, se meten de polisones para ayudar a Ricardo a ingresar a la compañía como el principal tenor y reunirlo con su amor, Rosa. Pero cuando son descubiertos se vuelven fugitivos de la justicia. Una vez en Nueva York, tienen que mantenerse un paso por delante de las autoridades y, al mismo tiempo, ayudar a Ricardo a lograr su sueño. En Una noche en la opera veremos a este par y ex empleado de Lassparri hacer algunas travesuras en el escenario durante el debut de la nueva opera en Nueva York.
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