John Turturro debutó en la cinta aclamada por la crítica Toro Salvaje (1980) de Martin Scorsese, en un papel que no tenía diálogos. Después Spike Lee lo eligió para aparecer en Haz lo correcto (1989), la cual se convirtió en la primera de una larga colaboración entre el director y Turturro, que incluye trabajar juntos en un total de nueve películas. Turturro también participó en una extensa colaboración con los hermanos Coen: protagonizó Barton Fink (1991), apareció en El gran Lebowski (1998) y en ¿Dónde estás, hermano? (2000). En 2004 ganó un premio Emmy por su interpretación del hermano de Adrian Monk, Ambrose, en la serie Monk de USA Network, y repitió el papel en numerosas ocasiones. También fue nominado y ganó varios premios de organizaciones cinematográficas como Screen Actors Guild, Festival de Cine de Cannes, Globos de Oro y otros. En 2019 se confirmó su participación en The Batman (2021) de Matt Reeves en el papel de Carmine Falcone.