Tuppence Middleton nació el 21 de febrero de 1987, en Bristol, Inglaterra, Reino Unido. Hija de Nigel y Tina Middleton, Tuppence creció en Somerset, donde, desde pequeña, estuvo involucrada en obras escolares. Estudió en la Britol Grammar School, para después pasar a la Arts Educational School, en Londres, donde recibió un título honorario en teatro.

Tras breves apariciones en televisión, Tuppence tuvo su primer gran papel en la cinta de suspenso, Tormented (2009), para luego participar en cintas como Skeletons (2010), Chatroom (2010), Cleanskin (2012) y en series como Sirens (2011), Sinbad (2012), Los espías de Varsovia (2013) y Black Mirror (2013).

Uno de sus papeles importantes fue en la cinta El Código Enigma (2014), al lado de Benedict Cumberbatch, para luego aparecer en El destino de Júpiter (2015) y Doble identidad (2015). Recientemente, la actriz ha participado en la serie, original de Netflix, Sense8 (2015-2018), a lo largo de 24 episodios.